جدا سازی، تکثیر و همسانه سازی ژن ltp از گیاه برنج، مطالعه بیان پروکاریوتی و تأثیر آن بر رشد برخی قارچهای بیماریزای گیاهی
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری - پژوهشکده بیوتکنولوژی
- نویسنده فاطمه زبردست
- استاد راهنما محمدرضا زمانی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1390
چکیده
یکی از مکانیسمهای دفاعی گیاهان در برابر عوامل بیماریزا، تولید پروتئین های دفاعی (pr) می باشد. یکی از انواع این پروتئین ها، پروتئین های ناقل لیپید (ltp) هستند. بررسی های انجام شده بر روی پروتئینltp گیاهان مختلف نشان می دهد فعالیت شدید مهاری این پروتئین ها در میان پاتوژن های گیاهی بیشتر بر روی قارچ ها می باشد. همچنین محققان با تولید گیاهان تراریخت مشاهده کردند که بیان این پروتئین های ضد میکروبی درگیاهان تراریخت سبب افزایش مقاومت آنها می شود. در این تحقیق به جداسازی ژن ltp از ژنوم گیاه برنج، بیان پروتئین ltp در سیستم پروکاریوتی و نهایتا بررسی فعالیت ضد قارچی آن پرداخته شد. بدین منظور استخراج dna ژنومی از گیاه برنج (oriza sativa) انجام شد. قطعه bp 300 مورد انتظار با استفاده از پرایمرهای اختصاصی که شامل سایت های لازم جهت کلونینگ بودند، به کمک pcr تکثیر و قطعه تکثیر شده به وکتور کلونینگ وارد گردید و تایید های لازم بر روی آن انجام شد.در این تحقیق گیاه برنج برای شناسایی و تکثیر ژنltp و همچنین بررسی خاصیت ضد قارچی محصول این ژن انتخاب گردید. جهت بیان پروتئین ltp در سیستم پروکاریوتی، ژن ltp در وکتور pet-24d (+) کلون گردید؛ و بیان آن در سلول میزبان rosetta(de3) مورد بررسی قرار گرفت. برای بهینه سازی بیان از تست تاگوچی و از فاکتورهای مختلف غلظت iptg، دمای انکوباسیون و زمان بعد از القا استفاده شد. باند مربوط به پروتئین ltp بیان شده بر روی ژل sds-page مشاهده گردید و سپس به کمک وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. پروتئین ltp بیان شده، با استفاده از ستون کروماتوگرافی تخلیص و سپس با روش برادفورد تعیین غلظت گردید. آزمون های زیستی بر روی پروتئین ltp تخلیص شده انجام گرفت. برای بررسی فعالیت ضد قارچی پروتئین ltp تخلیص شده بر روی قارچ های rhizoctonia solani ، botrytis cinerea ، sclerotinia sclerotiorum ، fusarium oxysporum ، fusarium sporotrichioides از آزمون radial diffusion assay استفاده شد. همچنین اثر مهار کنندگی این پروتئین بر روی رویش اسپور قارچ های alternaria brassicola و fusarium oxyspurum مورد بررسی قرار گرفت.
منابع مشابه
جداسازی، تکثیر و همسانه سازی ژن اسموتین از گیاه توتون و مطالعه تأثیر بیان پروکاریوتی آن بر رشد برخی قارچ های بیماری زای گیاهی
در این تحقیق ژن اسموتین گیاه توتون با تکنیک pcr از dna ژنومی گیاه توتون جداسازی و سپس در ناقل pjet1.2 همسانه سازی شد. صحت همسانه سازی ژن در ناقل با روش های colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید و ناقل نوترکیب حاصله pjaa-1 نام گذاری شد. ژن اسموتین پس از همسانه سازی توسط هضم آنزیمی از ناقل همسانه سازی خارج و در ناقل بیانی pet26b(+) کلون شد. صحت همسانه سازی ژن با روش های colony pcr، هضم آنزیم...
جداسازی و همسانه سازی ژن tlp از منابع گیاهی و بیان پروکاریوتی آن
pathogenesis (pr-pr) یکی از مکانیسم های دفاعی گیاهان در برابر پاتوژنها، تولید پروتئین های دفاعی می باشد. در بین thaumatin like protein (tlp) ، می باشد. یکی از انواع این پروتئینها related proteins دارای ( secale cereal ) و چاودار ( oryza sativa ) نظیر برنج poaceae گیاهان بعضی از اعضای خانواده می باشند. در این تحقیق جهت شناسایی، جداسازی، کلون کردن و بررسی ساختمان ژنی و پروتئینی tlp ژنهای چاود...
بررسی فیتوشیمیایی اسانس ) Cymbopogon parkeri Stapf) و فعالیت بیولوژیکی آن بر روی برخی قارچهای بیماریزای گیاهی
متن کامل
همسانه سازی ژن tfgd2شنبلیله، بیان پروکاریوتی آن و مطالع? اثر ضد قارچی پروتئین tfgd2 بیان شده
دفنسین ها می توانند بعنوان عوامل ضد قارچی در کنترل قارچ های بیماریزای گیاهی مورد استفاده قرار گیرند. بدین منظور cdna ژن دفنسین گیاه شنبلیله بعد از تایید، در ناقل همسانه سازی pjet1.2 زیرهمسانه سازی شد. پس از تأیید همسانه سازی این ژن، از سازه نوترکیبpjetsh1 خارج و در ناقل بیانی پروکاریوتی pet26 b(+) همسانه سازی و تأیید شد. پس از انتقال سازه نوترکیب جدید به نام petsh1 به میزبان بیانی e. coli bl21(...
همسانه سازی پیشبر 2A11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن
بیان موقت ژنهای بیگانه در بافتهای گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی میباشد. این روش سریع، انعطاف‌پذیر، ساده و در بافتهای تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2A11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجهفرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2A11 در میوه میشود. هدف از این تحقیق همسانهسازی پیشبر 2A11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجهفرنگی، پیشبر 2A11 با استفا...
متن کاملهمسانه سازی و بررسی بیان موقت پیشبر pat1 گیاه سیب زمینی با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن
To achieve the high level of gene expression, promoters are key elements. Patatin promoter has been used as a specific gene expression in potato tubers. Patatin is a group of glycol protein in potato tuber which is code by a multiple family genes. This protein makes up more than 40% of soluble proteins of potato tubers. Class I Promoters mainly responsible for tuber -specific expression patte...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری - پژوهشکده بیوتکنولوژی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023